Granica kvantifikacije. O odobravanju smjernica za validaciju analitičkih metoda za ispitivanje lijekova Granica formule kvantitativnog određivanja

Svaku instrumentalnu metodu karakterizira određena razina buke koja je povezana sa specifičnostima mjernog procesa. Stoga uvijek postoji granica koncentracije ispod koje se tvar uopće ne može pouzdano otkriti.

Granica detekcije S min, P - najmanji sadržaj pri kojem se ovom metodom može otkriti prisutnost komponente s danom razinom pouzdanosti.

Granica detekcije može se postaviti i minimalnim analitičkim signalom y min, koji se pouzdano može razlikovati od signala kontrolnog eksperimenta - y pozadine.

Statističke metode korištenjem Čebiševe nejednakosti dokazale su da se kvantitativno granica detekcije može odrediti pomoću izraza

gdje je s background standardna devijacija analitičkog pozadinskog signala; S je koeficijent osjetljivosti (koji se ponekad naziva jednostavno "osjetljivost"), karakterizira odgovor analitičkog signala na sadržaj komponente. Koeficijent osjetljivosti je vrijednost prve derivacije kalibracijske funkcije za dano određivanje koncentracije. Za pravocrtne kalibracijske krivulje, ovo je tangenta nagiba:

(Pažnja: nemojte zbuniti faktor osjetljivostiS s standardna devijacijas!)

Postoje i drugi načini izračuna granice detekcije, ali ova se jednadžba najčešće koristi.

U kvantitativnoj kemijskoj analizi obično se daje raspon određenih sadržaja ili koncentracija. Podrazumijeva raspon vrijednosti utvrđenih sadržaja (koncentracija) predviđen ovom metodologijom i ograničen donjom i gornjom granicom utvrđenih koncentracija.

Analitičare češće zanima donja granica utvrđene koncentracije s n ili sadržaja m n komponenta određena ovom metodom. Preko donje granice utvrđenog sadržaja obično uzimaju minimalnu količinu ili koncentraciju koja se može odrediti s relativnom standardnom devijacijom

. .

Primjer

Masena koncentracija željeza u otopini određena je spektrofotometrijskom metodom mjerenjem optičke gustoće otopina obojenih kao rezultat reakcije interakcije iona Fe 3+ sa sulfosalicilnom kiselinom. Za konstruiranje kalibracijske ovisnosti mjerene su optičke gustoće otopina s rastućim (specificiranim) koncentracijama željeza tretiranih sulfosalicilnom kiselinom.

Optičke gustoće referentne otopine (kontrolni eksperiment za reagense, tj. bez dodatka željeza, (pozadina) bile su 0,002; 0,000; 0,008; 0,006; 0,003.

Izračunati granica detekcije željeza.

Riješenje

1) Kao rezultat proračuna metodom najmanjih kvadrata (vidi primjer za kontrolni zadatak br. 5), dobivaju se vrijednosti za izgradnju kalibracijskog grafikona.

Izračunate vrijednosti za izradu kalibracijskog grafikona

2) Izračunavamo koeficijent osjetljivosti, tj. kutni koeficijent kalibracijske ovisnosti (S) prema podacima iz tablice.

3) Izračunajte pozadinska standardna devijacija, što je 0,0032 jedinice optičke gustoće.

4) Granica detekcije bit će, mg / cm 3

Kontrolni zadatak broj 6

Odredite granicu detekcije željeza u vodi.

Početni podaci : vrijednosti optičke gustoće pozadine (referentne otopine) pri izradi kalibracijskog grafa za određivanje željeza bile su 0,003; 0,001; 0,007; 0,005; 0,006; 0,003; 0,001; 0,005. Vrijednosti optičkih gustoća koje odgovaraju koncentraciji željeza u otopini prikazane su u tablici kontrolnog zadatka br. 5.

Izračunajte granicu detekcije željeza u mg / cm 3 prema koeficijentima osjetljivosti S, izračunatim na temelju dobivenih podataka za izgradnju kalibracijskog grafa metodom najmanjih kvadrata pri izvođenju kontrolnog zadatka br. 5;

Granica kvantifikacije

"... Granica kvantifikacije (LOQ) (u analitičkim određivanjima): najniža koncentracija analita ili analita u ispitnom uzorku koja se može kvantificirati s prihvatljivom razinom točnosti i pouzdanosti, kao što je pokazano zajedničkim testiranjem laboratorija ili drugih validacija odgovarajuće metode..."

Izvor:

"PREHRAMBENI PROIZVODI. METODE ANALIZE ZA OTKRIVANJE GENETSKI MODIFICIRANIH ORGANIZAMA I PROIZVODA DOBIVENIH OD NJIH. OPĆI ZAHTJEVI I DEFINICIJE. GOST R 53214-2008 (ISO 242676)" 2000.

(odobreno Naredbom Rostekhregulirovanie od 25.12.2008. N 708-st)

Službena terminologija... Academic.ru. 2012.

Pogledajte što je "Limit of Quantification" u drugim rječnicima:

granica kvantifikacije- 3.7 granica kvantifikacije [LOQ]: deseterostruko povećanje procjene standardne devijacije mase uzorka. Napomena Vrijednost LOQ koristi se kao prag iznad kojeg masa ... ...

granica ponovljivosti- 3.7 granica ponovljivosti: Apsolutna razlika između rezultata maksimalne i minimalne vrijednosti iz navedenog broja mjerenja izvršenih pod uvjetima ponovljivosti u skladu s GOST R ISO 5725 1. Izvor ... Rječnik-priručnik pojmova normativne i tehničke dokumentacije

granica reproduktivnosti 2.9 granica reproducibilnosti: Vrijednost ispod koje, s vjerojatnošću od 95%, leži apsolutna vrijednost razlike između dva rezultata ispitivanja dobivena u ponovljivim uvjetima. Izvor … Rječnik-priručnik pojmova normativne i tehničke dokumentacije

granica ponovljivosti (konvergencije).- 3.11 granična vrijednost ponovljivosti koja, uz razinu pouzdanosti od 95%, nije premašena apsolutnom vrijednošću razlike između dva mjerenja (ili ispitivanja) dobivena u ponovljivim uvjetima... Rječnik-priručnik pojmova normativne i tehničke dokumentacije

Intralaboratory Precision Limit- 3.11 granica unutarlaboratorijske preciznosti: Apsolutno odstupanje dopušteno za pretpostavljenu vjerojatnost P između dva rezultata analize dobivenih u uvjetima unutarlaboratorijske preciznosti. Izvor … Rječnik-priručnik pojmova normativne i tehničke dokumentacije

granica reproduktivnosti R- 2.19.2 granica reproducibilnosti R: apsolutna vrijednost razlike između dva rezultata ispitivanja u uvjetima ponovljivosti (vidi 2.19.1) s razinom pouzdanosti od 95%. 2.19.1, 2.19.2 (Promijenjeno izdanje, naslov = Promjena br. 1, IUS 12 2002). ... ... Rječnik-priručnik pojmova normativne i tehničke dokumentacije

MI 2881-2004: Preporuka. GSE. Tehnike kvantitativne kemijske analize. Postupci za provjeru prihvaćanja rezultata analize- Terminologija MI 2881 2004: Preporuka. GSE. Tehnike kvantitativne kemijske analize. Postupci za provjeru prihvatljivosti rezultata analize: 3.17 kritična razlika: Apsolutna razlika između ... ... Rječnik-priručnik pojmova normativne i tehničke dokumentacije

GOST R 50779.11-2000: Statističke metode. Statističko upravljanje kvalitetom. Pojmovi i definicije- Terminologija GOST R 50779.11 2000: Statističke metode. Statističko upravljanje kvalitetom. Pojmovi i definicije izvorni dokument: 3.4.3 (gornje i donje) granice regulacije Granica na kontrolnoj karti, iznad koje je gornja granica, ... ... Rječnik-priručnik pojmova normativne i tehničke dokumentacije

GOST R 50779.10-2000: Statističke metode. Vjerojatnost i osnovna statistika. Pojmovi i definicije- Terminologija GOST R 50779.10 2000: Statističke metode. Vjerojatnost i osnove statistike. Pojmovi i definicije izvorni dokument: 2.3. (opća) populacija Skup svih jedinica koje se razmatraju. Napomena Za slučajnu varijablu ... ... Rječnik-priručnik pojmova normativne i tehničke dokumentacije

RMG 61-2003: Državni sustav za osiguranje ujednačenosti mjerenja. Pokazatelji točnosti, ispravnosti, preciznosti metoda kvantitativne kemijske analize. Metode ocjenjivanja- Terminologija RMG 61 2003: Državni sustav za osiguranje ujednačenosti mjerenja. Pokazatelji točnosti, ispravnosti, preciznosti metoda kvantitativne kemijske analize. Metode ocjenjivanja: 3.12 Unutarlaboratorijska preciznost: Preciznost ... Rječnik-priručnik pojmova normativne i tehničke dokumentacije

MINISTARSTVO ZDRAVLJA RUSKOG FEDERACIJE

OPĆI FARMAKOPSKI ČLANAK

Validacija analitičkih metoda OFS.1.1.0012.15

Uveden po prvi put

Validacija analitičke metode je eksperimentalni dokaz da je metoda prikladna za namjeravanu svrhu.

Ovom Monografijom Opće farmakopeje uređuju se značajke analitičkih metoda, utvrđene u svrhu njihove validacije, te odgovarajući kriteriji za prikladnost validiranih metoda namijenjenih kontroli kvalitete lijekova: farmaceutskih supstanci i lijekova.

Metode za kvantitativno određivanje, uključujući metode za određivanje nečistoća i metode za određivanje granice sadržaja, podliježu validaciji. Tehnike provjere autentičnosti provjeravaju se ako je potrebno kako bi se potvrdila njihova specifičnost.

Tijekom validacije, analitička metoda se ocjenjuje prema dolje navedenim karakteristikama, odabranim uzimajući u obzir tipične preporuke navedene u tablici:

• specifičnost;
• granica detekcije;
• granica količine;
• analitičko područje (raspon);
• linearnost;
• ispravnost (istinitost);
• preciznost (preciznost);
• robusnost.

Tablica 1 - Karakteristike metoda utvrđenih tijekom validacije

*) može se odrediti ako je potrebno;

**) nedostatak specifičnosti jedne analitičke metode može se nadoknaditi korištenjem druge analitičke metode.

Ponovna validacija (ponovna validacija) metoda se provodi pri promjeni:

• tehnologije za dobivanje predmeta analize;
• sastav lijeka (predmet analize);
• prethodno odobrenu metodologiju analize.

1. Specifičnost

Specifičnost je sposobnost analitičkog postupka da jedinstveno procijeni analit u prisutnosti pridruženih komponenti.

Dokaz specifičnosti validirane metode obično se temelji na analizi podataka dobivenih korištenjem analize modelskih smjesa poznatog sastava.

Specifičnost metode koja se validira može se dokazati i odgovarajućom statističkom obradom rezultata analiza stvarnih objekata provedenih njome i paralelno s drugom, očito specifičnom, metodom (metodom čija je specifičnost dokazana).

1.1 Za postupke ispitivanja autentičnosti

Validirana metoda (ili skup metoda) mora pružiti pouzdane informacije o prisutnosti dane aktivne tvari u tvari ili obliku doziranja ako sadrži komponente predviđene recepturom, što je podložno eksperimentalnoj potvrdi.

Autentičnost djelatne tvari u farmaceutskoj tvari ili lijeku utvrđuje se u usporedbi sa standardnim uzorkom ili fizikalno-kemijskim ili kemijskim svojstvima koja nisu karakteristična za druge komponente.

1.2 Za postupke ispitivanja i ispitivanja nečistoća

Isti pristupi koriste se za validiranu metodu kvantifikacije i za ispitivanje nečistoća - mora se procijeniti njegova specifičnost za analit, odnosno eksperimentalno se potvrditi da prisutnost popratnih komponenti ne utječe na rezultat analize na nenamjeran način.

Dopušteno je ocijeniti specifičnost metode koja se validira kako analizom modelskih mješavina poznatog sastava koje sadrže analit, tako i usporedbom rezultata analiza stvarnih objekata dobivenih istovremeno korištenjem validirane i druge očito specifične metode. Rezultate dotičnih pokusa treba statistički obraditi.

Nedostatak specifičnosti testa može se nadoknaditi drugim dodatnim testom.

Prilikom validacije metoda, prema potrebi, mogu se koristiti uzorci lijekova koji su bili izloženi ekstremnim uvjetima (svjetlo, temperatura, vlažnost) u svrhu nakupljanja nečistoća u njima ili kemijski modificirani na bilo koji prikladan način.

Za kromatografske tehnike, pokažite razlučivost između dviju tvari koje se najbliže eluiraju u odgovarajućim koncentracijama.

1. GRANICA DETEKCIJE

Granica detekcije je najmanja količina (koncentracija) analita u uzorku koja se može detektirati (ili procijeniti) korištenjem validirane procedure.

Granica detekcije u slučajevima navedenim u tablici obično se izražava kao koncentracija analita (u % relativno ili dijelovi na milijun - ppm).

Ovisno o vrsti tehnike (vizualna ili instrumentalna), koriste se različite metode za određivanje granice detekcije.

2.1 Za metode s vizualnom procjenom rezultata analize

Ispituju se uzorci s različitim poznatim količinama (koncentracijama) analita i utvrđuje se minimalna vrijednost na kojoj se može vizualno procijeniti rezultat analize. Ova vrijednost je procjena granice detekcije.

2.2 Za metode s instrumentalnom ocjenom rezultata analize

2.2.1 Omjer signala i šuma

Ovaj pristup je primjenjiv na metode za koje se promatra osnovni šum. Usporedite vrijednosti signala dobivene za kontrolni eksperiment i za uzorke s niskim koncentracijama analita. Postavite minimalnu količinu (koncentraciju) analita u uzorku, pri kojoj je omjer analitičkog signala i razine šuma jednak 3.

Pronađena vrijednost je procjena granice detekcije.

2.2.2 Po vrijednosti standardne devijacije signala i nagibu kalibracijskog grafikona

Granica detekcije (LO) nalazi se jednadžbom:

PO = 3,3 S/b,

gdje S

b- koeficijent osjetljivosti, koji je omjer analitičkog signala i utvrđene vrijednosti (tangenta nagiba kalibracijske krivulje).

S i b

S S a slobodni član jednadžbe ovog grafa. Dobivena vrijednost granice detekcije, ako je potrebno, može se potvrditi izravnim pokusom pri količinama (koncentracijama) analita blizu pronađene vrijednosti granice detekcije.

U pravilu, ako postoje podaci o prikladnosti metode za pouzdano određivanje tvari u koncentracijama iznad i ispod standarda za njezin sadržaj utvrđenih specifikacijom, nije potrebno određivati ​​stvarnu granicu detekcije za takvu metoda.

1. KVANTITATIVNA GRANICA

Granica kvantifikacije je najmanja količina (koncentracija) tvari u uzorku koja se može kvantificirati pomoću provjerenog postupka s potrebnom točnošću i unutarlaboratorijskom (srednje) preciznošću.

Granica kvantifikacije je nužna značajka validacije metoda koje se koriste za procjenu malih količina (koncentracija) tvari u uzorku, a posebno za procjenu sadržaja nečistoća.

Ovisno o vrsti tehnike, za pronalaženje granice kvantifikacije koriste se sljedeće metode.

3.1 Za metode s vizualnom procjenom rezultata analize

Ispituju se uzorci s različitim poznatim količinama (koncentracijama) analita i utvrđuje se minimalna vrijednost pri kojoj se rezultat analize može dobiti vizualno s potrebnom točnošću i unutarlaboratorijskom (srednje) preciznošću.

3.2 Za metode s instrumentalnom ocjenom rezultata analize

3.2.1 Omjer signala i šuma

Postavite minimalnu koncentraciju analita u uzorku, pri kojoj je omjer analitičkog signala i razine buke oko 10:1.

3.2.2 Po vrijednosti standardne devijacije signala i nagibu kalibracijskog grafikona

Granica kvantifikacije (LQR) izračunava se jednadžbom:

PKO = 10 S/b,

gdje S Je li standardna devijacija analitičkog signala;

b- koeficijent osjetljivosti, koji je omjer analitičkog signala i utvrđene vrijednosti.

U prisutnosti eksperimentalnih podataka u širokom rasponu izmjerene vrijednosti S i b može se procijeniti metodom najmanjih kvadrata.

Za linearni kalibracijski dijagram, vrijednost S uzeti jednako standardnoj devijaciji S a slobodni član jednadžbe ovog grafa. Dobivena vrijednost granice kvantitativnog određivanja, ako je potrebno, može se potvrditi izravnim pokusom pri količinama (koncentracijama) analita blizu pronađene vrijednosti granice kvantitativnog određivanja.

gdje postoje dokazi o sposobnosti metode da pouzdano otkrije analit u koncentraciji iznad i ispod navedene brzine, općenito nije potrebno odrediti pravu granicu za ispitivanje.

1. ANALITIČKO PODRUČJE POSTUPKA

Analitičko područje tehnike je interval između gornje i donje vrijednosti analitičkih karakteristika određene komponente u objektu analize (njezina količina, koncentracija, aktivnost itd.). Unutar tog raspona, rezultati dobiveni metodom koja se validira trebali bi imati prihvatljivu razinu istinitosti i unutarlaboratorijske (srednje) preciznosti.

Na veličinu analitičkog područja metoda postavljaju se sljedeći zahtjevi:

- postupci kvantitativnog određivanja trebaju biti primjenjivi u rasponu od 80 do 120% nominalne vrijednosti analitičke karakteristike koja se utvrđuje;

- metode za procjenu ujednačenosti doziranja trebale bi biti primjenjive u rasponu od 70 do 130% nominalne doze;

- tehnike ispitivanja korištene u testu otapanja općenito bi trebale biti primjenjive u rasponu od 50 do 120% očekivane koncentracije aktivnog sastojka u mediju za otapanje;

- postupci ispitivanja čistoće moraju biti primjenjivi u rasponu od "Granice kvantitacije" ili "Granice detekcije" do 120% dopuštenog sadržaja utvrđene nečistoće.

Analitičko područje tehnike može se utvrditi iz raspona eksperimentalnih podataka koji zadovoljavaju linearni model.

1. LINEARNOST

Linearnost metode je prisutnost linearne ovisnosti analitičkog signala o koncentraciji ili količini analita u analiziranom uzorku unutar analitičkog područja metode.

Prilikom validacije metode, njezina linearnost u analitičkom području provjerava se eksperimentalno mjerenjem analitičkih signala za najmanje 5 uzoraka s različitim količinama ili koncentracijama analita. Eksperimentalni podaci obrađeni su metodom najmanjih kvadrata pomoću linearnog modela:

y = b · x + a,

NS- količinu ili koncentraciju analita;

y- veličina odgovora;

b- nagib;

a- slobodni član (OFS "Statistička obrada rezultata kemijskog pokusa").

Količine koje treba izračunati i prijaviti b, a i koeficijent korelacije r... U većini slučajeva koriste se linearne ovisnosti koje zadovoljavaju uvjet 0,99, a tek pri analizi tragova uzimaju se u obzir linearne ovisnosti za koje je 0,9.

U nekim slučajevima, mogućnost linearne aproksimacije eksperimentalnih podataka pruža se tek nakon njihove matematičke transformacije (na primjer, logaritam).

Za neke analitičke metode, koje se u načelu ne mogu temeljiti na linearnom odnosu između eksperimentalnih podataka, koncentracija ili količina tvari određuje se korištenjem nelinearnih kalibracijskih krivulja. U ovom slučaju, graf ovisnosti analitičkog signala o količini ili koncentraciji analita može se aproksimirati odgovarajućom nelinearnom funkcijom korištenjem metode najmanjih kvadrata, što je izvedivo uz prisutnost odgovarajućeg validiranog softvera.

1. PRAVO

Ispravnost tehnike karakterizira odstupanje prosječnog rezultata određivanja napravljenih njenom uporabom od vrijednosti koja se uzima kao istinita.

Potvrđena tehnika smatra se ispravnom ako vrijednosti za koje se pretpostavlja da su istinite leže unutar intervala povjerenja odgovarajućih prosječnih analitičkih rezultata dobivenih eksperimentalno korištenjem ove tehnike.

Za procjenu ispravnosti tehnika kvantifikacije primjenjivi su sljedeći pristupi:

a) analiza korištenjem validiranog postupka za standardne uzorke ili modelne smjese s poznatim sadržajem (koncentracijom) analita;

b) usporedbu rezultata dobivenih primjenom validirane metodologije i uzorne metodologije, čija je ispravnost prethodno utvrđena;

c) razmatranje rezultata proučavanja linearnosti metode koja se validira: ako se slobodni član u jednadžbi danoj u odjeljku 5 statistički značajno ne razlikuje od nule, tada korištenje takve metode daje rezultate bez sustavne pogreške.

Za pristupe "a" i "b" moguće je dobivene podatke prikazati u obliku jednadžbe linearne ovisnosti (regresije) između eksperimentalno pronađenih i pravih vrijednosti. Za ovu jednadžbu testiraju se hipoteze o jednakosti s jedinicom tangenta kuta nagiba b i nestajanje slobodnog termina a... U pravilu, ako se ove hipoteze prepoznaju kao točne s razinom pouzdanosti od 0,05, tada korištenje metode koja se provjerava daje točne, tj. bez pristranosti, rezultate.

1. PRECIZNOST

Preciznost tehnike karakterizira raspršivanje rezultata dobivenih njenom uporabom u odnosu na vrijednost prosječnog rezultata. Mjera ove disperzije je standardna devijacija rezultata jednog određivanja, dobivena za dovoljno veliki uzorak.

Preciznost se ocjenjuje za bilo koji postupak kvantifikacije na temelju rezultata najmanje tri određivanja za svaku od tri razine analita (donja, srednja i gornja) koje se nalaze unutar analitičke domene postupka. Ponovljivost se također može procijeniti za bilo koju metodu ispitivanja na temelju najmanje šest određivanja za uzorke s gotovo nominalnim sadržajem analita. U mnogim slučajevima, procjena preciznosti može se provesti prema rezultatima obrade eksperimentalnih podataka metodom najmanjih kvadrata, kako je navedeno u Monografiji Opće farmakopeje “Statistička obrada rezultata kemijskog pokusa”.

Preciznost se mora ispitati na homogenim uzorcima i može se procijeniti na tri načina:

- kao ponovljivost (konvergencija);

- kao unutarlaboratorijska (srednja) preciznost;

- kao međulaboratorijska preciznost (ponovljivost).

Rezultati evaluacije analitičke metode za svaku od opcija preciznosti obično se karakteriziraju odgovarajućom vrijednošću standardne devijacije rezultata zasebnog određivanja.

Obično se pri razvoju izvorne tehnike utvrđuje ponovljivost (ponovljivost) rezultata dobivenih njenom uporabom. Ako je potrebno razvijenu tehniku ​​uvrstiti u regulatornu dokumentaciju, dodatno se utvrđuje njezina unutarlaboratorijska (srednja) preciznost. Međulaboratorijska preciznost (ponovljivost) metode ocjenjuje se kada se ona treba uključiti u nacrt opće monografije, monografije ili regulatorne dokumentacije za farmakopejske standardne uzorke.

7.1 Ponovljivost (konvergencija)

Ponovljivost analitičkog postupka ocjenjuje se neovisnim rezultatima dobivenim pod istim propisanim uvjetima u istom laboratoriju (isti izvođač, ista oprema, isti skup reagensa) u kratkom vremenskom razdoblju.

7.2 Unutar laboratorija (srednja) preciznost

Unutarlaboratorijska (srednja) preciznost metode koja se validira ocjenjuje se u uvjetima rada jednog laboratorija (različiti dani, različiti izvođači, različita oprema itd.).

7.3 Međulaboratorijska preciznost (ponovljivost)

Međulaboratorijska preciznost (ponovljivost) metode koja se validira procjenjuje se ispitivanjem u različitim laboratorijima.

1. ODRŽIVOST

Stabilnost validirane metode je sposobnost održavanja utvrđenih karakteristika za nju u optimalnim (nominalnim) uvjetima i danih u tablici, uz vjerojatna mala odstupanja od ovih uvjeta analize.

Robusnost postupka ne bi se trebala određivati ​​u odnosu na lako kontrolirane uvjete ispitivanja. To drastično smanjuje potrebu za posebnim studijama o održivosti.

Stabilnost treba proučavati samo u slučajevima kada se metoda koja se validira temelji na korištenju analitičkih metoda koje su posebno osjetljive na vanjske uvjete, kao što su različite vrste kromatografije i funkcionalne analize. Po potrebi se procjena stabilnosti metodologije provodi u fazi njezina razvoja. Ako je vjerojatna niska stabilnost tehnike, provjera njezine prikladnosti provodi se bez greške izravno u procesu praktične uporabe.

Ispitivanje prikladnosti analitičkog sustava

Ispitivanje prikladnosti analitičkog sustava je test ispunjenja osnovnih zahtjeva za njega. Sustav koji se testira na prikladnost skup je specifičnih instrumenata, reagensa, standarda i uzoraka koji se analiziraju. Zahtjevi za takav sustav obično su navedeni u općoj monografiji za odgovarajuću analitičku metodu. Dakle, provjera prikladnosti analitičkog sustava postaje postupak uključen u postupak koji se validira.

Predstavljanje rezultata validacije

Protokol validacije analitičke metode trebao bi sadržavati:

- njegov puni opis, dovoljan za reprodukciju i koji odražava sve uvjete potrebne za analizu;

- procijenjene karakteristike;

- svi primarni rezultati koji su uključeni u statističku obradu podataka;

- rezultate statističke obrade podataka dobivenih eksperimentalno tijekom razvoja ili verifikacije validirane metode;

- ilustrativne materijale kao što su kopije kromatograma dobivene tekućinskom kromatografijom visoke učinkovitosti ili plinskom kromatografijom; elektroforetogrami, elektronički i infracrveni spektri; fotografije ili crteži kromatograma dobiveni tankoslojnom ili papirnatom kromatografijom; slike titracijskih krivulja, kalibracijski grafikoni;

- zaključak o prikladnosti metode koja se validira za uključivanje u normativni dokument.

Validacijski materijali za pojedine analitičke metode trebaju biti pripremljeni u obliku konsolidiranog izvješća o validaciji.

FAKULTET

RIJEŠENJE

U skladu s člankom 30. Ugovora o Euroazijskoj gospodarskoj uniji od 29. svibnja 2014. i stavkom 2. članka 3. Sporazuma o jedinstvenim načelima i pravilima za promet lijekova unutar Euroazijske ekonomske unije od 23. prosinca 2014., Odbor Euroazijske ekonomske komisije

odlučio:

1. Odobreti priložene Smjernice za validaciju analitičkih postupaka za ispitivanje droga.

2. Ova Odluka stupa na snagu istekom 6 mjeseci od dana službene objave.

Predsjednik Uprave
Euroazijska ekonomska komisija
T. Sargsyan

Smjernice za validaciju analitičkih postupaka za ispitivanje droga

ODOBRENO OD
Odlukom Upravnog odbora
Euroazijska ekonomska komisija
od 17. srpnja 2018. N 113

I. Opće odredbe

1. Ovaj Vodič definira pravila za provjeru valjanosti analitičkih metoda za ispitivanje lijekova, kao i popis karakteristika koje treba ocijeniti prilikom validacije ovih metoda i uključiti u registracijske dosjee koji se podnose ovlaštenim tijelima država članica euroazijskog ekonomskog razvoja. Unije (u daljnjem tekstu države članice, Unija).

2. Svrha validacije analitičkog postupka za ispitivanje lijekova je dokumentiranje njegove prikladnosti za namjeravanu svrhu.

II. Definicije

3. Za potrebe ovog Vodiča koriste se pojmovi koji znače sljedeće:

"analitički postupak" - tehnika za ispitivanje lijekova, koja uključuje detaljan opis slijeda radnji potrebnih za izvođenje analitičkog ispitivanja (uključujući opis pripreme ispitnih uzoraka, standardnih uzoraka, reagensa, korištenje opreme, konstrukciju kalibracijska krivulja, korištene formule za izračun itd.);

"ponovljivost" je svojstvo preciznosti u međulaboratorijskom ispitivanju;

"područje primjene (analitičko područje)" (raspon) - interval između najveće i najniže koncentracije (količine) analita u uzorku (uključujući te koncentracije), za koji se pokazalo da analitički postupak ima prihvatljivu razinu preciznost, točnost i linearnost;

"linearnost" je izravno proporcionalna ovisnost analitičkog signala o koncentraciji (količini) analita u uzorku unutar područja primjene (analitičko područje) tehnike;

"oporavak (povraćaj)" (oporavak) - omjer između dobivenih prosječnih i pravih (referentnih) vrijednosti, uzimajući u obzir odgovarajuće intervale povjerenja;

"ponovljivost (intra-assay preciznost)" je preciznost postupka kada se ponovljena ispitivanja izvode pod istim radnim uvjetima (na primjer, od strane istog analitičara ili grupe analitičara, na istoj opremi, s istim istim reagensima, itd.) na kratko vrijeme;

"ispravnost" (točnost, istinitost) - bliskost između prihvaćene prave (referentne) vrijednosti i primljene vrijednosti, koja se izražava vrijednošću otvorenosti;

"granična količina" - najmanja količina tvari u uzorku koja se može kvantificirati s odgovarajućom preciznošću i točnošću;

"granica detekcije" — najmanja količina analita u uzorku koja se može detektirati, ali nije nužno točno kvantificirana;

"preciznost" je izraz bliskosti (stupanj disperzije) rezultata (vrijednosti) između serija mjerenja provedenih na više uzoraka uzetih iz istog homogenog uzorka pod propisanim uvjetima;

"srednja preciznost" - učinak varijacija unutar laboratorija (različiti dani, različiti analitičari, različita oprema, različite serije (lotovi) reagensa, itd.) na rezultate ispitivanja identičnih uzoraka uzetih iz iste serije;

"specifičnost" - sposobnost analitičke tehnike da nedvosmisleno procijeni tvar koju treba odrediti neovisno o drugim tvarima (nečistoće, produkti razgradnje, pomoćne tvari, matriks (medij) itd.) prisutnih u ispitnom uzorku;

"robustnost" — sposobnost analitičkog postupka da bude otporan na učinke malih specificiranih promjena u ispitnim uvjetima, što ukazuje na njegovu robusnost u rutinskoj (standardnoj) uporabi.

III. Vrste analitičkih postupaka koje treba potvrditi

4. Ovaj Vodič razmatra pristupe validaciji za 4 najčešće vrste analitičkih postupaka:

a) testovi za identifikaciju (autentičnost);

b) ispitivanja za određivanje kvantitativnog sadržaja nečistoća (kvantitativna ispitivanja sadržaja nečistoća);

c) ispitivanja za određivanje graničnog sadržaja nečistoća u uzorku (granični testovi za kontrolne nečistoće);

d) kvantitativni testovi aktivnog dijela za određivanje aktivnog dijela molekule djelatne tvari u ispitnom uzorku.

5. Sve analitičke metode koje se koriste za kontrolu kvalitete lijekova moraju biti validirane. Ovaj Vodič ne pokriva validaciju analitičkih metoda za vrste testova koji nisu obuhvaćeni stavkom 4. ovog Vodiča (na primjer, testovi otapanja ili određivanje veličine čestica (disperzije) farmaceutske tvari, itd.).

6. Testovi za identifikaciju (autentičnost) u pravilu se sastoje od usporedbe svojstava (npr. spektralnih karakteristika, kromatografskog ponašanja, reaktivnosti itd.) ispitnog i referentnog materijala.

7. Ispitivanja za kvantificiranje nečistoća i ispitivanja za određivanje granice nečistoća u uzorku imaju za cilj ispravno opisivanje vrijednosti čistoće uzorka. Zahtjevi za validaciju metoda za kvantitativno određivanje nečistoća razlikuju se od zahtjeva za validaciju metoda za određivanje graničnog sadržaja nečistoća u uzorku.

8. Postupci kvantitativnog ispitivanja usmjereni su na mjerenje sadržaja analita u ispitnom uzorku. U ovom Vodiču kvantifikacija se odnosi na kvantitativno mjerenje glavnih komponenti farmaceutske tvari. Slični parametri validacije primjenjuju se na kvantificiranje aktivnog sastojka ili drugih sastojaka lijeka. Parametri validacije testa mogu se koristiti u drugim analitičkim postupcima (npr. ispitivanje otapanja).

Svrha analitičkih postupaka treba biti jasno definirana, budući da to određuje izbor validacijskih karakteristika koje treba procijeniti tijekom validacije.

9. Ocjenjuju se sljedeće tipične karakteristike validacije analitičkog postupka:

a) točnost (istinitost);

b) preciznost:

ponovljivost;

srednja (intralaboratorijska) preciznost;

c) specifičnost;

d) granica detekcije;

e) granica količine;

f) linearnost;

g) područje primjene (analitičko područje).

10. Najvažnije karakteristike validacije za validaciju različitih vrsta analitičkih postupaka prikazane su u tablici.

Stol. Validacijske karakteristike za validaciju različitih vrsta analitičkih postupaka

________________
* Ako se utvrdi ponovljivost, srednja preciznost nije potrebna.

** Nedostatak specifičnosti jedne analitičke metode može se nadoknaditi korištenjem jedne ili više dodatnih analitičkih metoda.

*** Može biti potrebno u nekim slučajevima (na primjer, kada su granica detekcije i normalizirana granica za sadržaj utvrđene nečistoće blizu).

Bilješka. "-" - karakteristika se ne vrednuje, "+" - karakteristika se vrednuje.


Navedeni popis treba smatrati tipičnim za validaciju analitičkih postupaka. Moguće su iznimke koje zahtijevaju zasebno obrazloženje od strane proizvođača lijeka. Takva karakteristika analitičke tehnike kao što je stabilnost (robustnost) nije prikazana u tablici, ali je treba razmotriti u odgovarajućoj fazi razvoja analitičke tehnike.

Ponovna potvrda (ponovljenje) može biti potrebna u sljedećim slučajevima (ali nije ograničena na njih):

promjena sheme za sintezu farmaceutske tvari;

promjene u sastavu lijeka;

promjena analitičke metodologije.

Ponovna provjera valjanosti se ne provodi ako je opravdanje dao proizvođač. Opseg produženja valjanosti ovisi o prirodi unesenih promjena.

IV. Metodologija validacije analitičkih postupaka

1. Opći zahtjevi za metodologiju za validaciju analitičkih metoda

11. Ovaj odjeljak sažima karakteristike koje se uzimaju u obzir prilikom validacije analitičkih metoda, te također predstavlja neke pristupe i preporuke za utvrđivanje različitih karakteristika validacije svake analitičke metode.

12. U nekim slučajevima (npr. kod dokazivanja specifičnosti) može se koristiti kombinacija više analitičkih metoda kako bi se osigurala kvaliteta farmaceutske tvari ili lijeka.

13. Treba prikazati i analizirati sve relevantne podatke prikupljene tijekom validacije i formule koje se koriste za izračun karakteristika valjanosti.

14. Mogu se koristiti i drugi pristupi osim onih navedenih u ovom Vodiču. Izbor postupka i protokola validacije odgovornost je podnositelja zahtjeva. U ovom slučaju, glavni cilj validacije analitičke metode je potvrditi prikladnost metode za namjeravanu svrhu. Zbog svoje složenosti, pristupi analitičkim postupcima za biološke i biotehnološke proizvode mogu se razlikovati od onih opisanih u ovom Vodiču.

15. Tijekom validacijske studije trebaju se koristiti referentni materijali poznatih i dokumentiranih karakteristika. Potrebna čistoća referentnih materijala ovisi o namjeni.

16. Različite karakteristike validacije razmatrane su u posebnim pododjeljcima ovog odjeljka. Struktura ovog odjeljka odražava napredak razvoja analitičke metode i procesa evaluacije.

17. Eksperimentalni rad treba planirati tako da se relevantne karakteristike validacije proučavaju istovremeno, dajući pouzdane podatke o sposobnostima analitičkog postupka (npr. specifičnost, linearnost, raspon primjene, istinitost i preciznost).

2. Specifičnost

18. Tijekom validacije testova identifikacije, nečistoće i kvantifikacije potrebno je provesti studije specifičnosti. Postupci potvrde specifičnosti ovise o namjeravanoj uporabi analitičke metode.

19. Način potvrđivanja specifičnosti ovisi o zadacima za čije je rješavanje data analitička metoda namijenjena. Nije u svim slučajevima moguće potvrditi da je analitička metoda specifična za određeni analit (potpuna selektivnost). U tom slučaju preporuča se koristiti kombinaciju 2 ili više analitičkih metoda.

Nedostatak specifičnosti jedne analitičke tehnike može se nadoknaditi korištenjem jedne ili više dodatnih analitičkih tehnika.

20. Specifičnost za različite vrste ispitivanja znači sljedeće:

a) kod ispitivanja za identifikaciju - potvrda da postupak dopušta identifikaciju analita;

b) kod ispitivanja na nečistoće - potvrda da postupak omogućuje ispravno prepoznavanje nečistoća u uzorku (na primjer, ispitivanje srodnih spojeva, teških metala, zaostalih otapala itd.);

c) u kvantitativnim testovima - potvrda da tehnika omogućuje utvrđivanje sadržaja ili aktivnosti analita u uzorku.

Identifikacija

21. Zadovoljavajući identifikacijski test trebao bi biti sposoban razlikovati strukturno blisko povezane spojeve koji mogu biti prisutni u uzorku. Selektivnost analitičkog postupka može se potvrditi dobivanjem pozitivnih rezultata (moguće usporedbom s poznatim standardnim uzorkom) za uzorke koji sadrže analit i negativnih rezultata za uzorke koji ga ne sadrže.

22. Da bi se potvrdilo nepostojanje lažno pozitivnih rezultata, može se provesti identifikacijski test za tvari slične strukture ili tvari koje prate analit.

23. Odabir tvari koje potencijalno ometaju ispitivanje treba biti opravdan.

Kvantifikacija i ispitivanje nečistoća

24. Prilikom potvrđivanja specifičnosti za analitički postupak korištenjem metode kromatografskog odvajanja, potrebno je dostaviti reprezentativne kromatograme s odgovarajućom identifikacijom pojedinačnih komponenti. Potrebno je koristiti slične pristupe drugim tehnikama koje se temelje na separaciji.

25. Kritična odvajanja u kromatografiji treba proučavati na odgovarajućoj razini. U slučaju kritičnog odvajanja, treba postaviti vrijednost razlučivosti 2 komponente koje se najbliže eluiraju.

26. Kada se koristi nespecifična metoda kvantifikacije, potrebno je koristiti dodatne analitičke metode i potvrditi specifičnost cjelokupnog skupa metoda. Na primjer, ako se kvantitativno određivanje provodi titrimetrijskom metodom tijekom oslobađanja farmaceutske tvari, može se nadopuniti odgovarajućim testom na nečistoće.

27. Pristup je isti i za kvantifikaciju i za ispitivanje nečistoća.

Prisutnost uzoraka nečistoća

28. U prisutnosti uzoraka nečistoća, utvrđivanje specifičnosti analitičkog postupka je kako slijedi:

a) za kvantitativno određivanje potrebno je potvrditi selektivnost određivanja tvari u prisutnosti nečistoća i (ili) drugih komponenti uzorka. U praksi se to radi tako da se uzorku (farmaceutskoj tvari ili lijeku) dodaju nečistoće i (ili) pomoćne tvari u odgovarajućoj količini i ako postoje dokazi o njihovom odsustvu utjecaja na rezultat kvantitativnog određivanja djelatne tvari;

b) pri ispitivanju na nečistoće specifičnost se može utvrditi dodavanjem nečistoća u farmaceutsku tvar ili lijek u određenim količinama i ako postoje dokazi o odvajanju tih nečistoća jedne od druge i (ili) od ostalih komponenti uzorka.

Bez nečistoća uzorka

29. Ako nema standardnih uzoraka nečistoća ili produkata razgradnje, specifičnost se može potvrditi usporedbom rezultata ispitivanja uzoraka koji sadrže nečistoće ili produkte razgradnje s rezultatima druge validirane metode (na primjer, farmakopejske ili druge validirane analitičke (neovisne ) metoda). Gdje je prikladno, referentni materijali za nečistoće trebaju uključivati ​​uzorke koji su pohranjeni pod određenim uvjetima stresa (svjetlo, toplina, vlaga, kisela (bazična) hidroliza i oksidacija).

30. U slučaju kvantifikacije potrebno je usporediti 2 rezultata.

31. U slučaju ispitivanja nečistoća potrebno je usporediti profile nečistoća.

32. Kako bi se dokazala korespondencija vrha analita samo jednoj komponenti, preporučljivo je provesti studije o čistoći pikova (na primjer, korištenje detekcije niza dioda, masena spektrometrija).

3. Linearnost

33. Linearni odnos treba procijeniti u cijelom rasponu primjene analitičke metode. Može se potvrditi izravno na farmaceutskoj tvari (razrjeđivanjem glavne standardne otopine) i (ili) na odvojenim izvaganim obrocima umjetnih (modelnih) mješavina komponenti lijeka pomoću predložene metode. Potonji aspekt može se proučavati tijekom određivanja područja primjene (analitičkog područja) metode.

34. Linearnost se procjenjuje vizualno crtanjem analitičkog signala kao funkcije koncentracije ili količine analita. Ako postoji jasan linearni odnos, dobivene rezultate treba obraditi prikladnim statističkim metodama (na primjer, izračunom regresijske linije korištenjem metode najmanjih kvadrata). Možda će biti potrebna matematička konverzija rezultata ispitivanja kako bi se dobila linearnost između kvantifikacije i koncentracije uzorka prije regresijske analize. Rezultati analize regresijske linije mogu se koristiti za matematičku procjenu stupnja linearnosti.

35. U nedostatku linearnosti, podatke testa treba matematički transformirati prije regresijske analize.

36. Za potvrdu linearnosti potrebno je odrediti i prikazati koeficijent korelacije ili koeficijent determinacije, presjek linearne regresije, nagib regresije i rezidualni zbroj kvadrata odstupanja te priložiti graf sa svim eksperimentalnim podacima.

37. Ako se linearnost ne opaža ni u jednoj vrsti matematičkih transformacija (na primjer, kod validacije imunoanalitičkih metoda), analitički signal se mora opisati pomoću odgovarajuće funkcije koncentracije (količine) analita u uzorku.

V. Područje primjene (analitičko područje)

39. Opseg primjene analitičke metode ovisi o njezinoj namjeni i utvrđuje se u proučavanju linearnosti. U okviru područja primjene, postupak treba osigurati potrebnu linearnost, ispravnost i preciznost.

40. Sljedeći rasponi primjene (analitička područja) analitičkih metoda trebaju se smatrati minimalno prihvatljivim:

a) za kvantitativno određivanje djelatne tvari u farmaceutskoj tvari ili lijeku - od koncentracije (sadržaja) od 80 posto do koncentracije (sadržaja) od 120 posto nazivne koncentracije (sadržaja);

b) za ujednačenost doziranja - od koncentracije (sadržaja) od 70 posto do koncentracije (sadržaja) od 130 posto, ako za lijek nije opravdan širi raspon ovisno o obliku doziranja (npr. inhalatori s odmjerenim dozama );

c) za ispitivanje otapanja - ± 20 posto (apsolutno) nazivnog područja uporabe. Na primjer, ako specifikacije za formulaciju s modificiranim otpuštanjem pokrivaju područje od 20 posto u prvom satu do 90 posto deklariranog sadržaja u 24 sata, validirani raspon upotrebe trebao bi biti od 0 do 110 posto deklariranog sadržaja;

d) za određivanje nečistoća - od granice detekcije nečistoće do 120% vrijednosti navedene u specifikaciji;

e) Za nečistoće koje su iznimno jake ili imaju toksične ili neočekivane farmakološke učinke, granica detekcije i granica kvantifikacije trebale bi biti razmjerne s razinom na kojoj se te nečistoće trebaju kontrolirati. Kako bi se potvrdili postupci ispitivanja nečistoća korištenih tijekom razvoja, možda će biti potrebno postaviti analitičku domenu blizu pretpostavljene (moguće) granice;

f) ako se kvantifikacija i čistoća proučavaju istovremeno pomoću jednog testa i koristi se samo 100% standard, linearna ovisnost treba biti u cijelom rasponu primjene analitičke metode, počevši od praga izvješćivanja za nečistoću (u skladu s pravilima za proučavanje nečistoća u lijekovima i utvrđivanje zahtjeva prema njima u specifikacijama koje je odobrila Euroazijska ekonomska komisija) do 120 posto sadržaja navedenog u specifikaciji za kvantitativno određivanje.

Vi. Pravo

41. Treba utvrditi točnost za cijeli raspon primjene analitičkog postupka.

1. Kvantifikacija aktivnih farmaceutskih sastojaka

Farmaceutska tvar

42. Može se koristiti nekoliko metoda procjene ispravnosti:

primjena analitičke tehnike na analit poznatog stupnja čistoće (na primjer, na standardni materijal);

usporedba rezultata analize dobivenih provjerenom analitičkom metodom i rezultata dobivenih metodom za koju se zna da je točna i/ili neovisnom metodom.

Točnost se može zaključiti nakon što se utvrdi preciznost, linearnost i specifičnost.

Lijek

43. Može se koristiti nekoliko metoda procjene ispravnosti:

primjena analitičke tehnike na umjetne (modelne) mješavine sastojaka lijeka, kojima je dodana unaprijed određena količina analita;

u nedostatku uzoraka svih sastojaka lijeka, moguće je lijeku dodati unaprijed određenu količinu farmaceutske tvari ili usporediti rezultate dobivene drugom tehnikom čija je ispravnost poznata i (ili) samostalna tehnika.

Zaključak o ispravnosti može se donijeti nakon utvrđivanja preciznosti, linearnosti i specifičnosti.

2. Kvantifikacija nečistoća

44. Točnost se utvrđuje na uzorcima (farmaceutske tvari i lijeka) kojima je dodana poznata količina nečistoća.

45. U nedostatku uzoraka utvrđenih nečistoća i (ili) produkata razgradnje, prihvatljivo je usporediti rezultate s rezultatima dobivenim neovisnom metodom. Dopuštena je uporaba analitičkog signala djelatne tvari.

46. ​​Treba navesti specifičan način izražavanja sadržaja pojedinih nečistoća ili njihovog zbroja (na primjer, u masenim postocima ili u postocima u odnosu na površinu vrha, ali u svim slučajevima u odnosu na glavni analit).

47. Točnost se ocjenjuje za najmanje 9 određivanja 3 različite koncentracije koje pokrivaju cijeli raspon primjene (tj. 3 koncentracije i 3 ponavljanja za svaku koncentraciju). Definicije trebaju uključivati ​​sve faze metodologije.

48. Točnost se izražava vrijednošću otvorenosti u postocima prema rezultatima kvantitativnog određivanja tvari dodane u poznatoj količini u analizirani uzorak, odnosno razlikom između dobivenih srednjih i pravih (referentnih) vrijednosti, uzimajući u obzir uzeti u obzir odgovarajuće intervale povjerenja.

Vii. Preciznost

49. Validacija testova i ispitivanja nečistoća uključuje određivanje preciznosti.

50. Preciznost je postavljena na 3 razine: ponovljivost, srednja preciznost i reproducibilnost. Preciznost treba utvrditi pomoću homogenih, autentičnih uzoraka. Ako je nemoguće dobiti homogeni uzorak, dopušteno je odrediti preciznost pomoću umjetno pripremljenih (modelnih) uzoraka ili otopine uzorka. Preciznost analitičkog postupka obično se izražava u terminima varijance, standardne devijacije ili koeficijenta varijacije serije mjerenja.

VIII. Ponovljivost

51. Ponovljivost se utvrđuje provođenjem najmanje 9 određivanja koncentracija unutar područja primjene analitičke metode (3 koncentracije i 3 ponavljanja za svaku koncentraciju), odnosno najmanje 6 određivanja koncentracije za uzorke sa 100% udjelom analita.

IX. Srednja (intralaboratorijska) preciznost

52. Stupanj do kojeg se uspostavlja srednja preciznost ovisi o uvjetima u kojima se analitički postupak koristi. Podnositelj zahtjeva mora utvrditi učinak slučajnih čimbenika na preciznost analitičkog postupka. Tipične varijable koje treba istražiti su različiti dani, analitičari, oprema itd. Te utjecaje nije potrebno posebno proučavati. Prilikom proučavanja utjecaja različitih čimbenika, poželjno je koristiti eksperimentalni dizajn.

X. Reproducibilnost

53. Reproducibilnost se odnosi na preciznost u međulaboratorijskom eksperimentu. Reproducibilnost treba utvrditi u slučaju standardizacije analitičke metode (na primjer, kada je uključena u Farmakopeju Unije ili u Farmakopeju država članica). Uključivanje podataka o ponovljivosti u registracijski dosje nije potrebno.

XI. Prikaz podataka

54. Za svaku vrstu preciznosti moraju se navesti standardna devijacija, relativna standardna devijacija (koeficijent varijacije) i interval pouzdanosti.

XII. Granica detekcije

55. Postoje različiti pristupi određivanju granice detekcije, ovisno o tome je li tehnika instrumentalna ili neinstrumentalna. Dopušteni su i drugi pristupi.

XIII. Vizualna procjena

56. Vizualna procjena može se koristiti i za neinstrumentalne i za instrumentalne tehnike. Granica detekcije utvrđuje se analizom uzoraka s poznatim koncentracijama analita i određivanjem njegovog minimalnog sadržaja pri kojem se pouzdano detektira.

XIV. Procjena granice detekcije u smislu omjera signal-šum

57. Ovaj pristup je primjenjiv samo na analitičke postupke za koje se promatra osnovni šum.

58. Određivanje omjera signal-šum provodi se uspoređivanjem signala dobivenih iz uzoraka s poznatim niskim koncentracijama sa signalima dobivenim iz slijepih uzoraka i utvrđivanjem minimalne koncentracije pri kojoj se analit može pouzdano detektirati. Omjer signala i šuma od 3:1 do 2:1 smatra se prihvatljivim za procjenu granice detekcije.

XV. Procjena granice detekcije od standardne devijacije analitičkog signala i nagiba kalibracijske krivulje

59. Granica detekcije (LOD) može se izraziti na sljedeći način:

gdje:

60. K-vrijednost se izračunava iz kalibracijske krivulje za analit. Procjena s može se izvršiti na nekoliko načina:

b) duž kalibracijske krivulje. Analizirajte rezultirajuću kalibracijsku krivulju ucrtanu za uzorke sa sadržajem analita blizu granice detekcije. Preostala standardna devijacija linije regresije ili standardna devijacija točke presjeka s ordinatnom osi (standardna devijacija presjeka linearne regresije) može se koristiti kao standardna devijacija.

XVI. Prikaz podataka

61. Potrebno je navesti granicu detekcije i način njezina određivanja. Ako se određivanje granice detekcije temelji na procjeni vizualnog ili omjera signal-šum, predstavljanje odgovarajućih kromatograma smatra se dovoljnim da ga opravda.

62. Ako se vrijednost granice detekcije dobije izračunom ili ekstrapolacijom, procjenu treba potvrditi neovisnim ispitivanjem dovoljnog broja uzoraka sa sadržajem analita, koji odgovara ili je blizu granice detekcije.

XVII. Granica kvantifikacije

63. Granica kvantitacije je nužna karakteristika validacije metoda koje se koriste za određivanje niskog sadržaja tvari u uzorku, posebno za određivanje nečistoća i (ili) produkata razgradnje.

64. Moguće je nekoliko pristupa određivanju granice kvantifikacije, ovisno o tome je li tehnika instrumentalna ili neinstrumentalna. Drugi pristupi su dopušteni.

XVIII. Vizualna procjena

65. Vizualna procjena može se koristiti i za neinstrumentalne tehnike i za instrumentalne.

66. Granica kvantifikacije obično se utvrđuje analizom uzoraka s poznatim koncentracijama analita i procjenom minimalne razine na kojoj se analit može kvantificirati s prihvatljivom točnošću i preciznošću.

XIX. Procjena ograničenja kvantifikacije signal-šum

67. Ovaj pristup je primjenjiv samo na metode mjerenja u kojima se promatra osnovni šum.

68. Određivanje omjera signal-šum provodi se uspoređivanjem izmjerenih signala dobivenih iz uzoraka s poznatim niskim koncentracijama analita sa signalima dobivenim iz slijepih uzoraka, te utvrđivanjem minimalne koncentracije pri kojoj se analit može pouzdano nalaziti. kvantificirano. Tipičan omjer signala i šuma je 10:1.

XX. Procjena granice kvantifikacije iz standardne devijacije signala i nagiba kalibracijske krivulje

69. Granica kvantifikacije (LQR) može se izraziti na sljedeći način:

gdje:

s je standardna devijacija analitičkog signala;

k je tangenta nagiba kalibracijske krivulje.

70. K-vrijednost se izračunava iz kalibracijske krivulje za analit. Procjena s može se izvršiti na nekoliko načina:

a) standardnom devijacijom slijepog uzorka. Mjeri se analitički signal za dovoljan broj praznih uzoraka i izračunava se standardna devijacija njihovih vrijednosti;

b) duž kalibracijske krivulje. Analizirajte rezultirajuću kalibracijsku krivulju za uzorke s analitom blizu granice kvantifikacije. Preostala standardna devijacija linije regresije ili standardna devijacija točke presjeka s ordinatnom osi (standardna devijacija presjeka linearne regresije) može se koristiti kao standardna devijacija.

XXI. Prikaz podataka

71. Potrebno je navesti granicu kvantifikacije i način njezina određivanja.

72. Granica kvantifikacije mora se naknadno potvrditi analizom dovoljnog broja uzoraka sa sadržajem analita jednakim ili blizu granice kvantifikacije.

73. Pristupi koji nisu gore navedeni mogu biti prihvatljivi.

XXII. Stabilnost (robustnost)

74. Proučavanje stabilnosti (robustnosti) mora se provoditi u fazi razvoja, količina istraživanja ovisi o analitičkoj metodologiji koja se razmatra. Pouzdanost analize potrebno je pokazati namjernim varijacijama parametara (uvjeta) metode.

75. Ako rezultati mjerenja ovise o promjeni uvjeta primjene analitičkog postupka, potrebno je strogo pratiti poštivanje tih uvjeta ili predvidjeti mjere opreza tijekom ispitivanja.

76. Kako bi se osiguralo da se analitička metoda održava kada se koristi, jedna od posljedica studije robusnosti trebala bi biti uspostava niza parametara prikladnosti sustava (npr. test rezolucije).

77. Uobičajene varijacije parametara su:

stabilnost otopina koje se koriste u analitičkim postupcima;

vrijeme ekstrakcije.

Parametri varijacije za tekućinsku kromatografiju su:

promjena pH mobilne faze;

promjena u sastavu mobilne faze;

različite kolone (različite serije i dobavljači);

temperatura;

brzina pokretne faze (brzina protoka).

Parametri varijacije za plinsku kromatografiju su:

različite kolone (različite serije i dobavljači);

temperatura;

brzina plina nosača.

XXIII. Procjena prikladnosti sustava

78. Procjena prikladnosti sustava sastavni je dio mnogih analitičkih tehnika. Ova ispitivanja temelje se na konceptu da oprema, elektronika, analitičke operacije i uzorci koji se analiziraju čine cjelovit sustav i moraju se kao takvi ocjenjivati. Kriteriji prikladnosti sustava trebaju se uspostaviti za određenu metodu i ovisiti o vrsti analitičke metode koja se validira. Dodatne informacije mogu se pronaći u Farmakopeji Unije ili u Farmakopejama država članica.



Elektronski tekst dokumenta
pripremio JSC "Kodeks" i ovjerio:
službena stranica
Euroazijska ekonomska unija
www.eaeunion.org, 20.07.2018